Staining of protonemal cells of Ceratodon purpureus (Hedw.) Brid. for better highlighting micronuclei in bryophytes

L'objectif de cette étude est de développer une technique de visualisation et de coloration de noyaux de cellules protonématales de Ceratodon purpureus (Hedw.) Brid. dans le but de développer un test de génotoxicité. Cette technique s'inscrit dans le développement de méthode d'évaluation des risques. Les bryophytes sont déjà très utilisées comme modèles biologiques en biosurveillance et en écotoxicologie. Pour les études d'écotoxicologie, il existe des bioessais, notamment le test micronoyaux. Ce test de génotoxicité est déjà pratiqué chez les plantes supérieures, nous avons souhaité élargir son utilisation aux plantes inférieures comme les mousses et plus particulièrement Ceratodon purpureus. Pour répondre aux critères du test micronoyaux, les cellules protonématales de Ceratodon purpureus ont été choisies comme modèle d'étude. La culture en milieu liquide de protonéma permet d'obtenir la quantité de biomasse nécessaire à la réalisation d'un bioessai. La mise au point d'une méthode reproductible de visualisation et de coloration des noyaux des cellules protonématales a été une étape indispensable et préalable à la réalisation du test micronoyaux. Ainsi pour cette étape de coloration, le colorant utilisé est l'orcéine acétique. Il s'agit du colorant de référence pour le test micronoyaux sur Vicia faba (AFNOR, 2004). Nos essais de coloration nous ont permis de mettre au point une technique reproductible de coloration des noyaux de cellules protonématales. Ensuite, pour tenter de visualiser des micronoyaux, nous avons utilisé notre méthode de coloration après une exposition des protonémas au cadmium. Le premier essai de coloration des micronoyaux suite à une exposition de protonéma au Cd n'a pas permis de mettre en évidence de micronoyaux en l'état de l'expérience. Des recherches supplémentaires méritent d'être menées en utilisant notamment d'autres agents clastogènes afin de valider nos résultats. Ainsi, les tests micronoyaux sur les cellules protonématales de Ceratodon purpureus sont une première dans la recherche scientifique. Son aspect novateur encourage à la poursuite des recherches.